动物博物馆知识库

 根据已报道的STLV病毒gag蛋白基因（genbank登录号：AY590142），人工合成猴STLV病毒gag基因，通过BamHI和HindIII特异性酶切，将其克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB，经PCR、酶切及测序鉴定，成功地构建了猴STLV病毒gag基因杆状病毒表达重组质粒pFastHTB-gag。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞，经卡那霉素、庆大霉素、四环素平板抗性筛选，PCR鉴定，表明获得了转座的杆粒Bacmid-gag。在此基础上，提取Bacmid-gag杆粒，并转染Sf9昆虫细胞，96h后反复冻融细胞，收集上清液，获得杆状病毒，并用来Sf9细胞，收获目的蛋白。通过SDS-PAGE和western bloting分析表明初步获得了表达的gag蛋白且具有良好的生物活性，大小约为52kD，为下一步以表达的gag蛋白为诊断抗原，替代现阶段以分离的病毒抗原和HTLV相关蛋白作为抗原的猴STLV病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。