一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法

	一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法
	王晓爱; 杨君兴; 潘晓赋; 陈小勇
	2012-08-07
专利权人	中国科学院昆明动物研究所
公开日期	2012-10-31
授权国家	中国
专利类型	发明
摘要	本发明涉及一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法,属于淡水水生生物细胞培养技术领域。鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法,是以鱇浪白鱼尾鳍组织细胞为材料,采用组织块法启动原代培养,在含有胎牛血清和人碱性成纤维细胞生长因子的pH值为7.0-7.4的DMEM/F12培养基中培养；采用胰蛋白酶消化法进行传代培养。本发明的有益效果在于：1、在保证鱼体存活的前提下,操作简便易行；2、构建的鱇浪白鱼鳍细胞系(AGF)形态为成纤维样细胞,细胞生长状态良好,能够连续传代,直接用于鱇浪白鱼细胞生物学特性及功能基因的研究,满足了对鱇浪白鱼分子细胞水平理论研究的需要；3、该构建方法也适用于其他鱼类构建鳍条的细胞系。
主权项	一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法,其特征在于该构建方法的具体步骤如下：a.制备细胞培养液选择DMEM/F12培养基,向培养基中加入胎牛血清和人碱性成纤维细胞生长因子,使胎牛血清的终浓度为20%,人碱性成纤维细胞生长因子的浓度为5?ng/ml,pH值为7.0?7.4,保存于4℃冰箱中,备用；b.原代培养先用8?mg/L高锰酸钾浸泡鲜活鱇浪白鱼10?min,对鱼进行整体消毒,在超净台上取鱇浪白鱼鳍条组织；用HBSS+100?IU/ml青霉素+100?μg?/ml链霉素+10?μg?/ml两性霉素B的溶液清洗,然后剪成±1?mm3的小块,对鳍条组织块用0.5%透明质酸酶和0.2%II型胶原酶联合消化30?min；经上述处理的组织块均匀接种于25?cm2细胞培养瓶中,加入DMEM/F12+20%FBS+5?ng/ml?bFGF+100?IU/ml青霉素+100?μg?/ml链霉素+10?μg?/ml两性霉素B的细胞培养液5?ml,在28℃培养箱中启动原代培养；取完组织的鱼体放回鱼缸中常规饲养,两个月后鳍条重新长出；c.继代培养待细胞长成单层后,吸出培养瓶中的培养液,用不含抗生素的HBSS溶液清洗两遍,加入0.25%的胰蛋白酶1?ml,消化2?min,细胞变圆后,加入原来吸出的培养液1?ml,用吸管吹打培养瓶底,制成细胞悬液；向细胞悬液内补入DMEM/F12+20%FBS+5?ng/ml?bFGF的细胞培养液8?ml,然后接种于两个培养瓶内,在28℃培养箱中培养；待细胞再次长成单层后,仍按c步骤进行传代培养。
申请日期	2012-08-07
专利号	CN102757934A
语种	中文
申请号	201210277940.6
专利代理人	昆明今威专利商标代理有限公司 53115
文献类型	专利
条目标识符	http://ir.kiz.ac.cn/handle/152453/11627
专题	科研部门_系统进化与生物地理学（杨君兴）科研部门_东南亚野生动物多样性（陈小勇）
作者单位	中国科学院昆明动物研究所
推荐引用方式 GB/T 7714	王晓爱,杨君兴,潘晓赋,等. 一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法. CN102757934A[P]. 2012-08-07.

条目包含的文件
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CN102757934A.pdf（840KB）	专利		开放获取	CC BY-NC-SA	请求全文