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KIZ OpenIR  > 基因起源组
AFⅠ基因植物表达载体的构建及抗冻百合的培育
王忠凯; 颜笑洒; 李艳霞; 赵娟; 和四梅; 董扬; 时晓菲; 张业胜; zhangyesheng1987@163.com
2018
发表期刊农业生物技术学报
期号6页码:1025-1033
摘要百合( Lilium brownii var. viridulum )是世界上主要的鲜切花之一，具有很高的观赏价值和经济价值。然而，低温会抑制百合的生长，严重时导致大面积减产。为提高百合抗冻能力，本研究对极地冻鱼( Anarhichas minor )的抗冻蛋白基因(antifreeze protein gene, AFPⅢ )进行植物密码子优化，合成抗冻基因(antifreeze gene, AFⅠ )序列。通过酶切连接的方法将 AFⅠ 基因插入Pcambia1390骨架载体，利用PCISV( Peanut chlorotic streak caulimovirus )启动子启动该基因的表达，构建了 AFⅠ 基因植物表达载体P1390-PCISV- AFⅠ 。将载体P1390-PCISV- AFⅠ 电击转化农杆菌( Agrobacterium )菌株EHA105，经菌落PCR检测发现载体P1390-PCISV- AFⅠ 已经成功转化入农杆菌菌株中。通过农杆菌介导的遗传转化方法将 AFⅠ 基因转化到受体东方百合品种木门( Lily )中，经PCR鉴定，确定 AFⅠ 基因已整合到受体基因组中。抗冻实验以及半定量RT-PCR研究结果表明，转基因阳性植株相较于野生型植株在 - 2 ℃ 情况下具有良好的抗冻效果。本研究结果对于抗冻植物新品种的培育具有重要的参考价值。
其他摘要Lily ( Lilium brownii var. viridulum ) is one of the main fresh cut flowers in the world whichpossesses both high ornamental and economic value. However, the yield will be greatly reduced because thelow temperature inhibits the growth of the lily. To improve the antifreeze function of Lily and breed the newcharacters, Antifreeze protein gene ( AFPⅢ ) originates from Anarhichas minor which was codon optimizedaccording to the codon usage bias in plants and the antifreeze gene ( AFⅠ ) was synthesized by the company.Then AFⅠ was inserted into Pcambia1390 vector by enzyme digestion and ligation with the Peanut chloroticstreak caulimovirus (PCISV) promoter. Thus the plants expression vector carrying AFⅠ gene was constructed.And then the P1390-PCISV- AFⅠ plasmid was transformed into Agrobacterium EHA105 by electric shock.Subsequently, AFⅠ gene was introduced into lily callus mediated by Agroinfection, and the results of PCRconfirmed that the AFⅠ gene had been integrated into Oriental Lily cultivar "Conca D or"．Restoring growthtest was carried out to examine the antifreezing function of the positive transgenic plants, and the results of the test revealed that experimental group had a great antifreezing function in - 2 ℃ compared with the controlgroup, and the Semi-quantitative reverse transcription PCR demonstrated that the expression of AFⅠ geneleads to the antifreezing function of transgenic plants. This study provides an important reference for thecultivation of new varieties of antifreeze plants.
关键词东方百合品种木门 植物表达载体 遗传转化 Afⅰ
资助者宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 宁夏农业综合开发土地治理科技推广项目(No.NTKJ2015-05-03) ; 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文献类型期刊论文
条目标识符http://ir.kiz.ac.cn/handle/152453/12123
专题基因起源组
通讯作者zhangyesheng1987@163.com
作者单位中国科学院昆明动物研究所/云南纳博生物科技有限公司
推荐引用方式
GB/T 7714		 王忠凯,颜笑洒,李艳霞,等. AFⅠ基因植物表达载体的构建及抗冻百合的培育[J]. 农业生物技术学报,2018(6):1025-1033.
APA 王忠凯.,颜笑洒.,李艳霞.,赵娟.,和四梅.,...&zhangyesheng1987@163.com.(2018).AFⅠ基因植物表达载体的构建及抗冻百合的培育.农业生物技术学报(6),1025-1033.
MLA 王忠凯,et al."AFⅠ基因植物表达载体的构建及抗冻百合的培育".农业生物技术学报 .6(2018):1025-1033.
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