三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性

	三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性
其他题名	Expression of Bm-TFF2 mutants in Escherichia coli and their cell migration-promoting activity
	余果宇 1,2; 向阳 1,3; 张红芸 4; 江萍 1; 李文辉 1; 张云 1; 张勇*1; zhyong@mail.kiz.ac.cn
	2011
发表期刊	动物学研究
卷号	32 期号:4 页码:379-385
合作性质	其它
摘要	大蹼铃蟾三叶因子Bm-TFF2具有较人TFF2更强的促细胞迁移和抗凋亡活性。该研究利用RT-PCR方法扩增得到野生型Bm-TFF2的基因,然后分别构建N端、C端和分子中两个精氨酸突变的突变体,最后连接表达载体产生pET32a(+)/Bm-TFF2突变型重组质粒,转入大肠杆菌中,经37℃培养,IPTG诱导,其融合蛋白主要存在于包涵体中,用组氨酸标签的亲合柱纯化溶解后的包涵体上清,进一步用RP-HPLC纯化得到硫氧还蛋白(TRX)/Bm-TFF2突变型融合蛋白。通过SDS-PAGE和Westernblotting检测分析其纯度和特异性。最终,从1L培养基中得到20mg纯度为95%的三种重组突变型融合蛋白。三种突变型重组蛋白都具有剂量依赖性的促细胞迁移活性,并且其活性无显著差异。该研究为进一步研究Bm-TFF2结构和功能的关系以及揭示其作用的分子机制奠定了基础。
其他摘要	Bm-TFF2, a trefoil factor from the large-webbed bell toad (Bombina maxima), can stimulate cell migration and inhibit cell apoptosis. To study the structure-function relationship of Bm-TFF2, we constructed wild-type and mutated Bm-TFF2 plasmids and expressed recombinant proteins in E. coli. The wild-type Bm-TFF2 gene encoding mature peptide was obtained by RT-PCR, while the N-terminal, C-terminal and two arginine mutated Bm-TFF2 clones were constructed, and ligated into pET-32a(+) expression vectors. The fusion proteins were induced by IPTG at 37°C. The mutant Bm-TFF2 fusion proteins expressed mainly in the inclusion bodies. The mutant (TRX)/Bm-TFF2 could be purified by using Ni 2+ -chelating chromatography and reverse-phase HPLC from the inclusion body supernatant. The fusion proteins were analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. The yield of mutant Bm-TFF2 fusion proteins of above 95% purity was about 20 mg/L. All three recombinant mutant proteins can promote the migration of AGS cells in a dose-dependent manner with no obvious activity difference.
关键词	Bm-tff2 突变体表达纯化细胞迁移
资助者	中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304).
收录类别	CSCD
语种	中文
资助者	中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). ; 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304).
CSCD记录号	CSCD:4295744
引用统计
文献类型	期刊论文
条目标识符	http://ir.kiz.ac.cn/handle/152453/7101
专题	科研部门_生物毒素与人类疾病（张云）科研部门_动物模型与人类重大疾病机理重点实验室
通讯作者	zhyong@mail.kiz.ac.cn
作者单位	1.中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室, 云南昆明 650223 2.昆明医学院生物化学教研室, 云南昆明650500 3.中国科学院研究生院, 北京100049 4.昆明医学院第一附属医院妇产科, 云南昆明 650032
推荐引用方式 GB/T 7714	余果宇,向阳,张红芸,等. 三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性[J]. 动物学研究,2011,32(4):379-385.
APA	余果宇.,向阳.,张红芸.,江萍.,李文辉.,...&zhyong@mail.kiz.ac.cn.(2011).三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性.动物学研究,32(4),379-385.
MLA	余果宇,et al."三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性".动物学研究 32.4(2011):379-385.

条目包含的文件
文件名称/大小	文献类型	版本类型	开放类型	使用许可
2012091413.pdf（1696KB）	期刊论文	出版稿	开放获取	CC BY-NC-SA	请求全文