金环蛇蛇毒中的一种新型胰蛋白酶抑制剂(英文)

	金环蛇蛇毒中的一种新型胰蛋白酶抑制剂(英文)
其他题名	A Novel Trypsin Inhibitor from Bungarus fasciatus Venom
	卢祥云 1; 王爱丽 2; 杨海龙 3; 赖仞*2,3; rlai@mail.kiz.ac.cn
	2008
发表期刊	中国天然药物
卷号	6 期号:2 页码:153—158
合作性质	其它
摘要	目的:从金环蛇蛇毒中分离纯化名为bungaruskunin 1的一种新型胰蛋白酶抑制剂,并从其毒腺的cDNA文库中克隆出该胰蛋白酶抑制剂的cDNA全序列。方法:通过Sephadex G-50,CM-Sephadex C-25,HPLC,RP-HPLC(C4 col-umn)方法分离纯化bungaruskunin 1。样品的丝氨酸蛋白酶抑制剂活性则是在室温条件下50mmol·L-1Tris-HCl,pH7.8的缓冲液中通过对显色底物的水解抑制作用来检测的。金环蛇毒腺RNA用TRIZOL提取,并用SMARTM PCR cDNA syn-thesis kit(Clontech)建成cDNA文库。根据其信号肽的保守区域合成引物从该文库中扩增出bungaruskunin 1的cDNA全序列,进行胶回收,酶连到pMD18-T载体中转化测序。结果:bungaruskunin1的前体由83个氨基酸组成,其中信号肽含有24个氨基酸,成熟肽即:bungaruskunin 1含有59个氨基酸。bungaruskunin 1的cDNA序列与从红腹伊澳蛇Pseudechis porphy-riacus中分离纯化得到的丝氨酸蛋白酶抑制剂blackelin的cDNA序列的相似性高达64%。bungaruskunin 1是一种含有保守Kunitz端的Kuntiz蛋白酶抑制剂家族的一员,从而能够抑制蛋白酶和弹性酶的活性。在cDNA文库中,我们同时还筛选到了2种新的β-bungarotoxin B链的序列。结论:这些发现很好地证明了蛇中Kunitz/BPTI胰蛋白酶抑制剂和毒性神经的家族可能起源于共同的祖先。; AIM：To purify and characterize a novel trypsin inhibitor named bungaruskunin 1 from the snake venom of Bungarus fasciatus, and to clone its eDNA from the eDNA library of B. fasciatus venomous glands. METHODS： Sephadex G-50, cation-exchange CM-Sephadex C-25, HPLC, and RP-HPLC（CA column） methods were used to isolate bungaruskunin 1. The inhibition effects of the sample on the hydrolysis of synthetic chromogenic substrates by serine proteases were assayed in 50 mM Tris- HCl, pH 7.8 at room temperature. The total RNA of B. fasciatus venomous glands were extracted using TRIzol method and the cDNA library were constructed by a SMARTM PCR cDNA synthesis kit（ Clontech）. Two primers （ positive primer, based on the conserved eDNA fragment encoding signal peptides of beta-bungarotoxin B chains and Kunitz inhibitors from Bungarus snakes, and reverse primer based on the adopter sequence in the cDNA library） were used to screen Kunitz inhibitor and beta-bungarotoxin B chain encoding sequences. The cDNA products with about 700 bp in length were reclaimed from 1% agarose gel, and purified before ligation into the pMD18-T vector. RESULTS： The predicted precursor was composed of 83 amino acid （aa） residues including a 24 aa signal peptide and a 59 aa mature bungaruskunin 1. Bungaruskunin 1 showed maximal similarity （64%） with the predicted serine protease inibitor blackelin deduced from the cDNA sequence of the red-bellied black snake Pseudechis porphyriacus. Bungarusktmin 1 is a Kunitz protease inhibitor with a conserved Kunitz domain and could exert inhibitory activity against trypsin and elastase. By screening the cDNA library, two new B chains of beta-bungarotoxin were also identified. CONCLUSION： The overall structures of bungaruskunin 1 and beta - bungarotoxin B chains are similar; especially they have highly conserved signal peptide sequences. These findings strongly suggest tbat snake Kunitz/BPTl protease inhibitors and neurotoxic homologs may bave originated from a common ancestor.
关键词	蛇毒丝氨酸蛋白酶抑制剂 Kunitz 金环蛇
资助者	中华人民共和国科学技术部资助项目(2006BAD06B07) ; 中华人民共和国科学技术部资助项目(2006BAD06B07) ; 中华人民共和国科学技术部资助项目(2006BAD06B07) ; 中华人民共和国科学技术部资助项目(2006BAD06B07)
收录类别	其他
语种	英语
资助者	中华人民共和国科学技术部资助项目(2006BAD06B07) ; 中华人民共和国科学技术部资助项目(2006BAD06B07) ; 中华人民共和国科学技术部资助项目(2006BAD06B07) ; 中华人民共和国科学技术部资助项目(2006BAD06B07)
文献类型	期刊论文
条目标识符	http://ir.kiz.ac.cn/handle/152453/923
专题	科研部门_天然药物功能蛋白质学科组（赖仞）科研部门_动物模型与人类重大疾病机理重点实验室
通讯作者	rlai@mail.kiz.ac.cn
作者单位	1.常熟理工学院生物系,常熟215500 2.南京农业大学生命科学学院农业部微生物环境工程重点实验室,南京210095 3.中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室动物毒素室,昆明650223
推荐引用方式 GB/T 7714	卢祥云,王爱丽,杨海龙,等. 金环蛇蛇毒中的一种新型胰蛋白酶抑制剂(英文)[J]. 中国天然药物,2008,6(2):153—158.
APA	卢祥云,王爱丽,杨海龙,赖仞*,&rlai@mail.kiz.ac.cn.(2008).金环蛇蛇毒中的一种新型胰蛋白酶抑制剂(英文).中国天然药物,6(2),153—158.
MLA	卢祥云,et al."金环蛇蛇毒中的一种新型胰蛋白酶抑制剂(英文)".中国天然药物 6.2(2008):153—158.

条目包含的文件
文件名称/大小	文献类型	版本类型	开放类型	使用许可
20086153.pdf（629KB）	期刊论文	出版稿	开放获取	CC BY-NC-SA	请求全文