人胎脑NT-4基因的体外构建

KIZ OpenIR > 分子免疫生物学

	人胎脑NT-4基因的体外构建
其他题名	The Construction of NT-4 Gene of Human Embryonic Brain in Vitro
	李劲涛 1; 朱兴宝 2; 徐丹 1; 王廷华 1; 张华堂 3; 刘佳 1
	2008
发表期刊	昆明医学院学报
卷号	29 期号:4 页码:65-70
合作性质	其它
摘要	目的体外构建人神经生长因子-4（neurotrophin-4,NT-4）与质粒载体pEGFP-N1（卡那霉素抗性）的重组体,为后续的转基因移植治疗脊髓损伤创造条件.方法用Trizol法提取人胎脑组织总RNA,经RT-PCR扩增,EorRⅠ和BamHⅠ核酸内切酶酶切电泳纯化获得人神经营养因子-4（NT-4）DNA.用含质粒载体pEGFP-N1DNA的大肠杆菌接种经划板,挑选菌落、振荡培养,并用碱裂解法提取质粒载体pEGFP-N1DNA,经酶切、电泳纯化后,通过连接、转化感受态细胞,DNA小量提取法获得NT-4目的基因与质粒载体pEGFP-N1DNA的重组体,经DNA测序证实.结果用上述方法成功获得NT-4-pEGFP-N1重组体.结论此方法是一种体外构建人胎脑NT-4基因的成熟、稳定而有效的方法,可为后续的神经干细胞转染NT-4基因移植治疗神经系统损伤创造条件.
其他摘要	Objective To Construct the recombinant of NT-4 gene of embryonic human brain and the vector of pEGFP-N1 in vitro to provide foundation for the transgenic therapy of spinal cord injury （SCI）. Methods By Using Trizol method to distill RNA from the brain tissues of human embryo, through RT-PCR and purification by electrophoresis we got the NT-4 DNA, verified by EorR Ⅰ and BamH Ⅰ digestion and DNA concentration detecting. By surge culture of the E.eoli containing the DNA of the the pEGFP-N1 vector and distilling of it by plasmid Miniprep Kit Ⅰ Protocol, we got the DNA of the pEGFP-N1 vector. After purification by electrophoresis, the protocol of link follow up translation of the E.coli competent cells JM109, and distilling of the DNA of recombinant of NT-4 and pEGFP-N1 vector by plasmid Miniprep Kit Ⅰ Protocol, we got the DNA of recombinant of NT-4 and pEGFP-N1, confirmed by enzyme digestion, electrophoresis and DNA sequence. Results We got the DNA of recombinant of NT-4 and pEGFP-N1 vector successfully. Conclusion Our method is a mature, stable and effective method to construct NT-4 gene of human brain in vitro which deserved to be applied in the research of gene therapy of spinal cord injury.
关键词	人胎脑神经营养因子-4 基因构建体外
资助者	云南省教育厅科研基金重点项目（07C10388） ; 云南省教育厅科研基金重点项目（07C10388）
收录类别	其他
语种	中文
资助者	云南省教育厅科研基金重点项目（07C10388） ; 云南省教育厅科研基金重点项目（07C10388）
文献类型	期刊论文
条目标识符	http://ir.kiz.ac.cn/handle/152453/964
专题	分子免疫生物学
作者单位	1.昆明医学院神经科学研究所,云南昆明 650031 2.成都军区昆明总医院神经外科,云南昆明650032 3.中国科学院昆明动物研究所,云南昆明650223
推荐引用方式 GB/T 7714	李劲涛,朱兴宝,徐丹,等. 人胎脑NT-4基因的体外构建[J]. 昆明医学院学报,2008,29(4):65-70.
APA	李劲涛,朱兴宝,徐丹,王廷华,张华堂,&刘佳.(2008).人胎脑NT-4基因的体外构建.昆明医学院学报,29(4),65-70.
MLA	李劲涛,et al."人胎脑NT-4基因的体外构建".昆明医学院学报 29.4(2008):65-70.

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200829467.pdf（436KB）	期刊论文	出版稿	开放获取	CC BY-NC-SA	请求全文