| 干细胞自我更新支持因子的表达和功能研究 |
| 其他题名 | Research on the expressions and functions of two stem cell Self-Renewal support factor
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| 刘欢
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| 学位类型 | 博士
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| 导师 | 赖仞
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| 2011-05
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| 学位授予单位 | 中国科学院研究生院
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| 学位授予地点 | 北京
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| 学位专业 | 动物学
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| 关键词 | 华西雨蛙
干细胞自我更新支持因子
胚胎发育
肿瘤
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| 摘要 | 我们首次从华西雨蛙皮肤中发现能够支持人类胚胎干细胞（hESCs）、恒河猴胚胎干细胞（rESCs）和猴神经干细胞（rNSCs）自我更新的干细胞支持因子（Support Factor），命名为AnSF。 接着我们利用免疫染色和流式细胞仪检测发现AnSF在10 ng/ml就可以有效地促进hESCs或者rNSCs自我更新。我们采用Western blot的方法进行分析AnSF在MAPK、Akt、TGF-b、Wnt以及转录因子调节网络中的作用，我们发现AnSF能够抑制ERK和JNK途径的磷酸化，同时它也会抑制Akt的磷酸化。在TGF-b信号通路中，AnSF能够促进Smad2的磷酸化，同时抑制Smad1的磷酸化。在Wnt通路中，AnSF表现出和FGF2不同的作用机制，在转录因子调控网络中，AnSF和FGF2都可以激活干细胞干性关键基因Oct4和Nanog的表达。 我们设计了三个实验来探讨它们的相互作用。首先，SPR体外结合实验说明AnSF和FGF2的体外结合很弱。其次，活性电泳结果也表明AnSF和FGF2之间并没有直接相互作用。最后，我们在细胞水平检测AnSF对SGC7901胃癌细胞系表达FGF2的影响，发现FGF2和AnSF之间的确存在着剂量依赖性反馈调节的机制。 我们还探讨了AnSF在非洲爪蟾胚胎发育中的作用，结果显示，AnSF在胚胎发育中早期的时候可以明显减缓胚胎发育分化的速度。 由于干细胞更新和肿瘤发生之间密切的关联，以及在AnSF研究的基础上，使我们产生了研究HSDNSF在肿瘤中到底扮演什么角色的疑问。 我们采用RT-PCR和ELISA结合的方法研究了HSDNSF在胃癌和肠癌患者正常组织、瘤旁组织和肿瘤组织中的含量。经检测发现，HSDNSF在胃癌患者的肿瘤组织中表达量相比正常组织明显下降，而在肠癌患者中P>0.05，正常组织和肿瘤组织中HSDNSF没有差异。为了进一步探讨HSDNSF的作用，我们构建了HSDNSF的原核表达模型，并成功获得了重组HSDNSF，然后我们选用人体常见的四种肿瘤细胞系：A549，SGC7901，HepG2，MCF7，进行HSDNSF的细胞增殖实验，结果显示，HSDNSF在200 ng/ml和高浓度1 µg/ml两个浓度对四种肿瘤细胞系均没有明显的增殖或者抑制活性，我们验证了HSDNSF对鸡胚新生血管的影响，发现加入100 ng FGF2的胚胎主血管和毛细血管的发育情况都非常好，而100 ng FGF2+200 ng HSDNSF加样组血管的形成受到明显抑制。 我们用免疫缺陷的裸鼠构建了小鼠胃癌模型，验证HSDNSF在高、中、低三个剂量， HSDNSF低中剂量组静脉给药后对人胃癌裸小鼠移植瘤有一定的生长抑制作用。 结合AnSF的实验结果，为了系统了解和阐述HSDNSF及其同源蛋白在生物发育中的作用，我们构建了基于Cre-LoxP条件性敲除小鼠模型，系统研究mSDNSF在多种组织中条件性敲除以后对小鼠表型和生理活动的影响，该实验目前还在进行当中。 |
| 语种 | 中文
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| 文献类型 | 学位论文
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| 条目标识符 | http://ir.kiz.ac.cn/handle/353002/6797
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| 专题 | 科研部门_天然药物功能蛋白质学科组（赖仞）
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推荐引用方式
GB/T 7714 |
刘欢. 干细胞自我更新支持因子的表达和功能研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院,2011.
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