HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立

	HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立
其他题名	Expression and Purification of HIV-1 Protease and the Establishmentof a Method for Protease Inhibitor Screening
	王云华 1,3; 王睿睿 1,3; 杨柳萌 1; 李健峰 2; 徐维明 2; 郑永唐*1; zhengyt@mail.kiz.ac.cn
	2006
发表期刊	中国病毒学
卷号	21 期号:2 页码:126—130
合作性质	其它
摘要	从HIV-1IIIB病毒RNA经RT-PCR得到HIV-1蛋白酶编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1蛋白酶表达载体。阳性克隆转染E.coliBL21DE3,经IPTG诱导,蛋白酶以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白量的40%。包涵体经TritonX-100洗涤后溶解于8M尿素,溶解后的蛋白溶液经sephacyls-200H.R分子筛柱纯化后纯度达到90%以上,收集蛋白酶峰稀释复性并通过超滤进行浓缩。经检测,纯化的蛋白酶具有较高的活性。用荧光标记的蛋白酶底物检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响,表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选。
其他摘要	HIV-protease coding sequence was amplified from HIV-1ⅢB RNA by one- step RT-PCR. The PCR product was inserted into the pet28a expression vector with an additional ATG start codon before and TAA stop codon after the coding sequence. Positive clone was selected and transformed into E. coli BL21 DE3. Cells were cultured in LB medium and induced by IPTG. The recombinant protease was expressed in the form of inclusion body and was up to 40% of total bacterial protein. The inclusion body was washed by Triton X-100 before dissolved in 8M urea and then applied on sephacyl s-200 H.R column. The purity of the protease reached 90% after purification. Protease fraction was collected and diluted in refolding buffer and left at 4℃ for 24 h. The diluent was concentrated by ultrafiltration. The activity of recombinant protease and the inhibiting effect of indinavir were analyzed by FRET with synthesized fluorescence-labeled peptide. The results above indicates that the method can be used to screen inhibitor of HIV-1 protease.
关键词	Hiv-1蛋白酶表达纯化抑制剂
资助者	国家高技术研究发展计划(2003AA219142);国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14);中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216;KSCX1-SW-11);云南省自然科学基金(2002C0066M);云南省科技攻关计划(2004NG12) ; 国家高技术研究发展计划(2003AA219142);国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14);中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216;KSCX1-SW-11);云南省自然科学基金(2002C0066M);云南省科技攻关计划(2004NG12) ; 国家高技术研究发展计划(2003AA219142);国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14);中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216;KSCX1-SW-11);云南省自然科学基金(2002C0066M);云南省科技攻关计划(2004NG12) ; 国家高技术研究发展计划(2003AA219142);国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14);中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216;KSCX1-SW-11);云南省自然科学基金(2002C0066M);云南省科技攻关计划(2004NG12)
收录类别	其他
语种	中文
资助者	国家高技术研究发展计划(2003AA219142);国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14);中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216;KSCX1-SW-11);云南省自然科学基金(2002C0066M);云南省科技攻关计划(2004NG12) ; 国家高技术研究发展计划(2003AA219142);国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14);中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216;KSCX1-SW-11);云南省自然科学基金(2002C0066M);云南省科技攻关计划(2004NG12) ; 国家高技术研究发展计划(2003AA219142);国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14);中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216;KSCX1-SW-11);云南省自然科学基金(2002C0066M);云南省科技攻关计划(2004NG12) ; 国家高技术研究发展计划(2003AA219142);国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14);中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216;KSCX1-SW-11);云南省自然科学基金(2002C0066M);云南省科技攻关计划(2004NG12)
文献类型	期刊论文
条目标识符	http://ir.kiz.ac.cn/handle/152453/1113
专题	科研部门_分子免疫药理学（郑永唐）
通讯作者	zhengyt@mail.kiz.ac.cn
作者单位	1.中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室,昆明650223 2.中国医学科学院医学生物学研究所,云南昆明650231 3.中国科学院研究生院,北京100039
推荐引用方式 GB/T 7714	王云华,王睿睿,杨柳萌,等. HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立[J]. 中国病毒学,2006,21(2):126—130.
APA	王云华.,王睿睿.,杨柳萌.,李健峰.,徐维明.,...&zhengyt@mail.kiz.ac.cn.(2006).HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立.中国病毒学,21(2),126—130.
MLA	王云华,et al."HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立".中国病毒学 21.2(2006):126—130.

条目包含的文件
文件名称/大小	文献类型	版本类型	开放类型	使用许可
2006212126.pdf（518KB）	期刊论文	出版稿	开放获取	CC BY-NC-SA	请求全文