一种简易的人艾滋病毒( HIV21) 载量测定方法的建立与初步评价

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	一种简易的人艾滋病毒( HIV21) 载量测定方法的建立与初步评价
其他题名	The establishment and preliminary evaluation of a simple and practical method for the quantitation of HIV-1 load
	夏雪山 1,2; 徐焕兵 1; 冯汉平 1; 贲昆龙*1
	2003
发表期刊	中国免疫学杂志
卷号	19 期号:11 页码:779-782
合作性质	其它
摘要	目的 :建立一种简易的HIV 1感染者和艾滋病人血浆病毒载量测定的方法。方法 :构建含保守的引物SK14 5 SK4 31扩增靶序列的重组质粒pSPgag737,重组质粒体外转录产物经系列稀释得到HIV 1定量测定的外参照 ,在同样条件下以引物SK14 5 SK4 31对外参照和待测样品进行RT PCR扩增 ,用电泳图谱分析系统分析经EB染色的扩增产物电泳图谱 ,作出外参照的初始加入拷贝数与光强度的标准曲线 ,获得相应的回归方程 ,进而计算出待测样品的HIV 1病毒载量。结果 :重组质粒pSPaga737经酶切和PCR鉴定 ,确认含有引物SK14 5 SK4 31的扩增靶序列 ,用重组质粒体外转录 ,得到了 1～ 10 5copies的 10倍系列稀释的外参照 ,外参照标准曲线有较好的线性关系 (r =0 96 )。该方法的测定范围为 5× 10 2 ～ 5× 10 7拷贝 ml血浆。对 10个样品进行 3次重复测定 ,平均变异系数较小 (CV =2 0 % )。结论 :所建立的HTV 1病毒载量定量测定方法 ,操作简单 ,价格便宜 ,特异性好 ,同时有较好的可重复性。
其他摘要	Objective :To develop a simple and practical methodfor the quantitation of plasma HIV 2 1 load in HIV 2 1 infected and AIDS patients. Methods:The recombinant plasmid pSPgag737 containing the target sequence of primers SK145 Π SK431 was constructed. The tran 2 scripted RNA in vitro from recombinant plasmid was serially diluted to obtain the external standard for the quantitation of HIV 2 1 load. All the standards and examined patient samples were amplified with RT 2 PCR USINGprimers SK145 Π SK431. The electrophoresis image with EB stain 2 ingwas analyzed with Kodak Digital Science Electrophoresis Documentation and Analysis System 120(EDAS120) ,and the standard curve of ex 2 ternal standard was calculated. Thereafter , the HIV 2 1 loadsof examined sampleswere computed. Results:The resultsof PCR and restriction en 2 donuclease digestion showed the target sequence of primers SK145 Π SK431 was inserted into the recombinant plasmid pSPgag737. The detectable range of pSPgeg 737 2 transcripted external standard was 10 ～ 10 5 copies per PCR reaction. The correlation coefficient of external standard be 2 tween the input copies and fluorescence intensity was 0 1 96. The higher intra 2 assay reproducibility( CV = 20 %)was demonstrated by triplicate test of 10 patient samples. The HIV 2 1 load which can be detected by this method rangedfrom 5 × 10 2 to 5 × 10 7 copies per ml plasma. Conclu 2 sion :A simple , practical and reproducible methodfor quantitationof HIV 2 1 load was established. It is an useful tool in basic research and clin 2 ical practice on AIDS.
关键词	Hiv-1 病毒载量外参照标准曲线
资助者	云南省与中国科学院省院合作项目资助(96S004) ; 云南省与中国科学院省院合作项目资助(96S004)
收录类别	其他
语种	中文
资助者	云南省与中国科学院省院合作项目资助(96S004) ; 云南省与中国科学院省院合作项目资助(96S004)
文献类型	期刊论文
条目标识符	http://ir.kiz.ac.cn/handle/152453/1408
专题	其他
作者单位	1.中国科学院昆明动物研究所,昆明650223 2.中国科学院研究生院,北京100039
推荐引用方式 GB/T 7714	夏雪山,徐焕兵,冯汉平,等. 一种简易的人艾滋病毒( HIV21) 载量测定方法的建立与初步评价[J]. 中国免疫学杂志,2003,19(11):779-782.
APA	夏雪山,徐焕兵,冯汉平,&贲昆龙*.(2003).一种简易的人艾滋病毒( HIV21) 载量测定方法的建立与初步评价.中国免疫学杂志,19(11),779-782.
MLA	夏雪山,et al."一种简易的人艾滋病毒( HIV21) 载量测定方法的建立与初步评价".中国免疫学杂志 19.11(2003):779-782.

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20031911779.pdf（184KB）	期刊论文	出版稿	开放获取	CC BY-NC-SA	请求全文