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从头起源的酵母新基因的功能和正反链编码的基因相互作用的新机制的研究
其他题名Studies on Function of a De novo-Originated New Gene in S. cerevisiae and New Interacting Mechanism between Sense-Antisense Gene Pairs
李丹
学位类型博士
导师王文
2010
学位授予单位中国科学院研究生院
学位授予地点北京
关键词年轻新基因mdf1 酵母 从头起源 酵母有性生殖信号通路 正反链基因相互作用 生长
摘要基因从头起源一直被传统观念认为是近乎不可能的事件。虽然近年来有一些 基因起源于非编码序列的实例的报道,但所有这些从头起源的基因都没有确凿的 编码蛋白的能力的证据。在本工作的前半部分,我们在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 中发现了一个从头起源的蛋白编码基因MDF1。通过全面的遗传学、 细胞生物学和分子生物学等研究手段,我们细致地揭示了MDF1 在酿酒酵母中 获得的新功能。在营养充足的情况下,MDF1 编码的蛋白质Mdf1p 通过与一个 S. cerevisiae 交配型决定因子MATα2 结合抑制了酿酒酵母交配通路,从而极大程 度上抑制了S. cerevisiae 的交配行为,使S. cerevisiae 节省下更多的能量用于快速 的无性繁殖。我们的工作首次为从头起源的基因提供了确凿的蛋白编码能力的证 据,而且证明年轻的新基因也可以像保守的老基因一样在一些基本的生命过程发 挥关键的作用,为提高物种的适应性作出重要贡献。同时我们的工作在机制上阐 明一个新进化出的基因如何被一个已有的信号通路募集,这为更深刻理解信号通 路的进化提供了有益参考。 在本工作的后半部分,我们发现了一种新的正反链编码的基因对相互作用的 分子机制。最近全基因组转录谱的研究提示:在很多真核生物的基因组中,很大 一部分双链DNA 链都有编码能力,这些分别由正反两条链编码的基因之间可能 存在的相互作用已被公认为一种基因调控的重要方式。现在已知的正反链基因相 互作用的分子机制包括RNAi, 转录干扰,RNA-诱导的组蛋白去乙酰化,RNA 编辑等,所有这些反链基因对正链基因的调控机制都依赖于非编码的反链RNA 的存在,但编码蛋白的反链基因能否对正链基因行使调节功能还是未知。在本工 作中,我们发现编码新基因MDF1 的同一座位的反链基因可以编码一个保守的 基因ADF1, 而且MDF1 和ADF1 对酿酒酵母生长产生相反的影响(MDF1 可以 促进生长,但ADF1 抑制生长)提示MDF1 和ADF1 之间存在相互作用。对这种 相互作用的分子机制的深入研究揭示ADF1 编码的蛋白Adf1p 以转录抑制因子的 方式结合在MDF1 的启动子区,从而抑制MDF1 的转录。这种相互作用需要反 链编码的蛋白而不是RNA 参与,所以不同于任何一种已知的正反链相互作用机 制。我们还进一步发掘出这种抑制效应在S. cerevisiae 中起作用的生理条件。当 营养丰富时,Mdf1p 抑制性地结合非发酵碳源代谢的控制因子Snf1p, 从而促进可发酵碳源被快速利用,使S. cerevisiae 获得最快的生长速度。当营养减少时, Adf1p 抑制MDF1 表达,从而促进非发酵碳源的利用。我们前后两部分的工作还 为生殖代价提供了一种机制上的解释。有性生殖和无性繁殖是两种负相关的过 程,有性生殖总会以生长速度减慢为代价,但至今没有一种分子机制能把这两个 拮抗的过程联系起来。Mdf1p 同时处在有性生殖和无性繁殖两条信号通路中,抑 制交配行为而加速生长,所以Mdf1p 实现了两条信号通路之间的对话。
其他摘要Origin of a new protein-coding gene de novo from non-coding sequence was thought to be a rare event with near-zero probability. Although recently origin of de novo protein-coding genes has attracted increasing attention, none of the reported de novo genes has received direct evidence for its protein-coding ability and how it functions in an organism. In this study, we identified a de novo originated gene MDF1 in Saccharomyces cerevisiae. We not only provide solid in vivo evidence for its protein-coding ability but also clearly reveal its pathway involvement. Based on phenotypic, genetic, cytological and biochemical evidence, we show that MDF1 can physically bind one of the mating type determinants, MATα2 protein, and subsequently suppress the downstream haploid-specific genes. By doing so, MDF1 decreases mating efficiency of the baker’s yeast in rich medium, which limits the cost of mating, and consequently confers selective advantage to the species probably through promoting vegetative growth. Our results prove that a newly generated gene can not only associate with a fundamental pathway, but also take charge of the basic biological process at the most upstream node. These new findings shed new lights on several important issues including functionalization of a de novo originated gene, evolution of pathways, and regulation of the mating pathway in the budding yeast. Another part of this work is to study the molecular mechanism of sense-antisense gene pair interaction. Recent transcription profiling studies have revealed an unexpectedly large proportion of antisense transcripts in eukaryotic genomes. These antisense genes have been implicated in the regulation of sense gene expression. However, all the reported regulatory mechanisms including RNAi, antisense RNA-induced histone deacetylation and transcription interference rely on the non-coding antisense RNAs, whether the protein-coding antisense gene can serve a regulatory role remains an open question. In this study, we found that a protein encoded by the antisense gene ADF1 binds to the promoter of the newly evolved sense gene MDF1 and suppresses its transcription in S. cerevisiae. The sense gene MDF1 shortens the lag phase of vegetative growth by physically interacting with SNF1, the governing factor of nonfermentable carbon source utilization, and thus confers selective advantage to yeasts through rapidly consuming glucose. For avoiding the concomitant side-effects of mad growth, ADF1 takes the responsibility of a transcription suppressor shortly after the expression level of MDF1 reaches a peak. Together, our results not only present a new mechanism of sense-antisense interaction, but also provide great insight on how the antagonistic gene pair makes a concerted effort in taking maximum advantage of the changing environment.
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.kiz.ac.cn/handle/152453/6490
专题基因起源组
推荐引用方式
GB/T 7714
李丹. 从头起源的酵母新基因的功能和正反链编码的基因相互作用的新机制的研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院,2010.
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